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NEST細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟你知道嗎

點擊次數(shù):2057 更新時間:2019-09-26
   NEST細胞培養(yǎng)在藥理學中的應用比較廣泛。通過NEST細胞培養(yǎng)的生長曲線可計數(shù)細胞增長的指數(shù),從而可以直觀地了解細胞生長與死亡的動態(tài)變化,一般用于檢測各種藥物對細胞生長的影響。利用培養(yǎng)細胞的放射自顯技術(shù),研究細胞的物質(zhì)代謝、動態(tài)變化和細胞周期等,對于藥物作用機制的研究有重要作用。細胞培養(yǎng)可用于抗動脈粥樣硬化、血糖等藥物的研究等應用。
 
  在NEST細胞培養(yǎng)過程中,經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清,常使用的BI胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜,影響后續(xù)實驗的結(jié)果,我們在實驗中使用10%的BI澳洲胎牛血清培養(yǎng)NEST細胞,效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的BIFBS或者20%的BI胎牛血清,要根據(jù)具體細胞選擇合適的BI胎牛血清濃度。
 
  首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的)
 
  其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。
 
  如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。老化的會比較多,對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在NEST細胞培養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題.